Plataforma BIOSTATION para imageamento de células vivas em tempo real

Fonte financiadora: Convênio CT-INFRA FINEP 01.12.0361.03

 

O BioStation IM-Q da Nikon é um incubador de células com sistema de monitoramento em tempo real, que permite que usuários efetuem capturas de imagens de células vivas. O sistema facilita a execução de uma série de  experimentos de curto e longo prazo, incluindo estudos de crescimento celular, morfologia e expressão proteica, fornecendo um controle ambiental consistente de temperatura, umidade e concentração de gás, em combinação com um sistema de captura de imagens de fase e fluorescência. A capacidade de perfusão das amostras observadas também expande suas possibilidades experimentais. 

 

O BioStation IM-Q inclui um microscópio invertido motorizado, uma câmara incubadora e uma câmera CCD resfriada de alta sensibilidade em um sistema integrado. O sistema produz imagens de contraste de fase alta qualidade/resolução, usando um LED vermelho como fonte de luz transmitida. Com imagem de fluorescência em 2 canais (vermelho e verde), usa os cubos de filtro padrão da Nikon e o sistema de iluminação Intensilight, além de uma câmera digital DS-Qi1 monocromática de alta sensibilidade e ultra alta qualidade da Nikon. 

 

É possível monitorar até quatro diferentes condições experimentais com a placa de cultura especializada Hi-Q4, com vários pontos de captura em cada condição. Esta placa também possui uma face superior plana paralela que impede a distorção do trajeto da luz pelo menisco e permite observações de contraste de fase de alta qualidade. O equipamento pode capturar imagens com aumentos de 20X, 40X e 80X. Além do software de captura e controle, o software NIS-Elements AR permite analisar quantitativamente (ferramenta BioAnalysis) parâmetros como migração celular, proliferação, wound healing, entre outros.

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Eletroporador4D-Nucleofector - Lonza

Fonte financiadora: Convênio CT-INFRA FINEP 01.12.0361.03

 

A eletroporação é um método físico de transfecção, que permeabiliza a membrana celular através da aplicação de um pulso elétrico que move moléculas da membrana, gerando poros transitórios que permitem a entrada de biomoléculas exógenas (DNA, RNA e proteínas ) nas células. A eficiência de transfecção de grandes fragmentos de DNA por esse método é muito grande, tanto para a maioria das linhagens celulares contínuas, quanto para células primárias.

O eletroporador Nucleofector-4D (Lonza) exibe taxas de eficácia de transfecçãomais elevadas, quando comparado aos eletroporadores tradicionais, devido à optimizações metodológicas que aumentam a transfecção diretamente ao núcleo (“nucleofecção”). O Nucleofector-4D é equipado com a Unidade de Controle (Core Unit) e com o módulo operacional X, no qual células em suspensão podem ser transfectadas, seja em cubetasestéreis de 100μL, ou em “strips” estéreis com 16-wells (20 μL/poço), ideais para a optimização do método. Kits de transfecção, a serem adquiridos à parte pelos usuários, foram otimizados pelo fabricante para a transfecção para da maioria das linhagens comercialmente disponíveis.

http://bio.lonza.com/uploads/tx_mwaxmarketingmaterial/Lonza_ProductCitationLists_Cell_List__Integrated_Solutions_for_Primary_Cells_and_Transfection.pdf

 

Programas de eletroporação específicos para as mesmas linhagens podem ser acionados através do software de controle do Nucleo fector-4D. Tipos celulares não constantes da lista irão requerer a execução de um procedimento de optimização. Recomenda-se usar 1-5 x106 células nas cubetasde 100 μLe 2 x105 células nos 16-well strips. Os usuários interessados devem consultar informações detalhadas no site http://knowledge.lonza.com  (LonzaKnowledgeCenter).

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