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- Última atualização: 25 Março 2021
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Untracentrífuga HITACHI himac modelo CP-80WX (Tóquio, Japão)
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Eletroporador4D-Nucleofector - Lonza
Fonte financiadora: Convênio CT-INFRA FINEP 01.12.0361.03
A eletroporação é um método físico de transfecção, que permeabiliza a membrana celular através da aplicação de um pulso elétrico que move moléculas da membrana, gerando poros transitórios que permitem a entrada de biomoléculas exógenas (DNA, RNA e proteínas ) nas células. A eficiência de transfecção de grandes fragmentos de DNA por esse método é muito grande, tanto para a maioria das linhagens celulares contínuas, quanto para células primárias.
O eletroporador Nucleofector-4D (Lonza) exibe taxas de eficácia de transfecçãomais elevadas, quando comparado aos eletroporadores tradicionais, devido à optimizações metodológicas que aumentam a transfecção diretamente ao núcleo (“nucleofecção”). O Nucleofector-4D é equipado com a Unidade de Controle (Core Unit) e com o módulo operacional X, no qual células em suspensão podem ser transfectadas, seja em cubetasestéreis de 100μL, ou em “strips” estéreis com 16-wells (20 μL/poço), ideais para a optimização do método. Kits de transfecção, a serem adquiridos à parte pelos usuários, foram otimizados pelo fabricante para a transfecção para da maioria das linhagens comercialmente disponíveis.
Programas de eletroporação específicos para as mesmas linhagens podem ser acionados através do software de controle do Nucleo fector-4D. Tipos celulares não constantes da lista irão requerer a execução de um procedimento de optimização. Recomenda-se usar 1-5 x106 células nas cubetasde 100 μLe 2 x105 células nos 16-well strips. Os usuários interessados devem consultar informações detalhadas no site http://knowledge.lonza.com (LonzaKnowledgeCenter).
Células transfectadas por eletroporação ou em preparo para monitoramento na plataforma de imageamento BIOSTATION poderão ser hospedadas nas estufas instaladas na Sala de Cultura de Células do LabAngio para esta finalidade. As estufas permitem a regulagem tanto dos níveis de CO2 quanto de O2, incluindo a simulação de hipóxia tecidual. Esta última função, no entanto, aguarda a adequação do módulo de gases de alimentação, a fim de ser disponibilizado aos usuários.
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- Última atualização: 24 Março 2021
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